(资料图片仅供参考)
1、外显子捕捉(exontrapping)是构建一种载体,从其插入片段中识别和回收外显子序列,从而克隆目的基因。
2、捕捉外显子的载体pETV—SD是一种反转录病毒穿梭载体(shuttlevector),即可在不同种生物中如大肠杆菌和酵母,细菌和哺乳动物细胞等进行复制的载体(见图5—14)。
3、因为凡是有内含子和外显子的基因在转录后都要经过RNA剪接,这就需要有剪接供体(splicingdonor,SD)位点和剪接受体(splicingacceptor,SA)位点。
4、因此,SA位点可作为基因的标志。
5、pETV—咀载体的克隆位点上游有一个“外显子捕捉序列” 外显子(exontrapcassette),可用来识别载体的插入片段中有无SA位点。
6、它含有β—珠蛋白(HBG)基因的第1个外显子及其有功能的SD位点,该基因的间隔序列(IVS)和α,β—半乳糖苷酶(αβ—GAL)基因。
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